科普：藥物代謝物液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)的體外代謝模型有哪些？

藥物代謝物液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)的體外代謝模型

在藥物研發(fā)中，預(yù)測(cè)藥物在人體內(nèi)的代謝途徑和產(chǎn)物至關(guān)重要。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）憑借其高靈敏度、高選擇性和強(qiáng)大的定性定量能力，成為檢測(cè)藥物及其代謝物的金標(biāo)準(zhǔn)。而可靠的體外代謝模型是生成這些代謝物以供檢測(cè)的關(guān)鍵前置步驟。常用的體外模型包括：

1. 肝微粒體： 最常用、最成熟的模型。通過(guò)超速離心從肝臟（人、大鼠、犬等）中分離出富含藥物代謝酶（尤其是CYP450酶和UGTs）的微粒體組分。其優(yōu)勢(shì)在于制備相對(duì)簡(jiǎn)單、成本較低、酶活性穩(wěn)定、易于實(shí)現(xiàn)高通量篩選，特別適合研究I相代謝（氧化、還原等）和部分II相代謝（如葡萄糖醛酸化）。

2. 肝細(xì)胞： 使用新鮮分離的、凍存的或原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞（人或動(dòng)物來(lái)源）。肝細(xì)胞保留了完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)、所有代謝酶（I相和II相）以及輔因子和轉(zhuǎn)運(yùn)體，能更全面地模擬肝臟的生理代謝環(huán)境，尤其適用于研究涉及多個(gè)酶步驟或需要完整細(xì)胞功能的代謝途徑。但培養(yǎng)難度和成本較高，活性維持時(shí)間有限。

3. 肝S9組分： 包含肝微粒體和胞質(zhì)溶膠成分，因此同時(shí)含有I相酶（主要在微粒體）和重要的II相酶（如谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶GSTs、磺基轉(zhuǎn)移酶SULTs，在胞質(zhì)溶膠）。它是研究同時(shí)涉及I相和II相代謝的便捷折中方案。

4. 重組表達(dá)代謝酶： 利用基因工程表達(dá)單一的人源代謝酶（如特定CYP450同工酶、UGT）。主要用于研究特定酶對(duì)藥物的代謝作用，明確代謝途徑歸屬，或評(píng)估藥物-藥物相互作用潛力。其“純凈”背景排除了其他酶系的干擾。

廣州中森檢測(cè)的肝微粒體法應(yīng)用

廣州中森檢測(cè)在體外藥物代謝研究領(lǐng)域，尤其在肝微粒體體外代謝模型結(jié)合LC-MS/MS檢測(cè)方面具備成熟技術(shù)和豐富經(jīng)驗(yàn)。其服務(wù)流程通常包括：

1. 孵育體系建立： 使用人或特定動(dòng)物（如大鼠、犬）來(lái)源的高質(zhì)量肝微粒體，在優(yōu)化的緩沖液體系中加入輔因子（如NADPH用于I相代謝，UDPGA用于葡萄糖醛酸化反應(yīng)）和目標(biāo)藥物。

2. 孵育反應(yīng)： 在嚴(yán)格控制的時(shí)間（通常數(shù)分鐘到數(shù)小時(shí)）和溫度（通常37°C）下進(jìn)行代謝反應(yīng)。

3. 反應(yīng)終止與樣品處理： 加入終止液（如含內(nèi)標(biāo)的乙腈或甲醇）終止反應(yīng)，沉淀蛋白，離心取上清液進(jìn)行LC-MS/MS分析。

4. LC-MS/MS檢測(cè)： 利用高效液相色譜（HPLC/UHPLC）分離藥物原型及代謝物，通過(guò)高分辨或三重四極桿質(zhì)譜進(jìn)行高靈敏度、高特異性的檢測(cè)和結(jié)構(gòu)鑒定/定量分析。

廣州中森檢測(cè)憑借標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程、符合GLP規(guī)范的質(zhì)量管理體系以及專(zhuān)業(yè)的分析團(tuán)隊(duì)，能夠?yàn)榭蛻?hù)提供準(zhǔn)確、可靠的肝微粒體體外代謝研究數(shù)據(jù)，為藥物早期代謝特征評(píng)估、代謝物鑒定、代謝穩(wěn)定性篩選及潛在藥物相互作用研究提供關(guān)鍵支持。